ARTICULO

IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS CONTRA ISLOTE DE PÁNCREAS POR INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA COMO MARCADOR PRONÓSTICO DE DIABETES

OPORTO - VELASCO. Amparo; SOSA - TORDOYA Luis Fernando; GARCIA - RODRIGUEZ Carmiña;
SANCHEZ - GARCIA Lilia.

Laboratorio de Histocompatibilidad e Inmunogenética. Instituto de Servicios de Laboratorio de Diagnóstico e Investigación en Salud (SELADIS), Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas (FCFB), Universidad Mayor de San Andrés.
Correspondencia: - lise_oporto@yahoo.es - lise_oporto@hotmail.com

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RESUMEN

En el presente trabajo se implementó la técnica de Inmunofluorescencia Indirecta para la identificación de Anticuerpos Contra Islote de Páncreas (ICA's) en pacientes Diabéticos tipo 1 y en sus familiares de primer grado. Para lo cual se utilizó un sustrato convencional (Páncreas de rata) y otro comercial (Páncreas de mono), además de reactivos específicos incluyendo un control positivo primario y un conjugado adsorbido específico. La comparación de resultados fue importante para elegir el sustrato más conveniente además de evaluar sus ventajas y desventajas. Conjuntamente, se correlacionaron los resultados con datos clínicos de los pacientes obtenidos mediante la Historias Clínicas concretas identificando factores de riesgo de Diabetes Mellitus en individuos genéticamente predispuestos.

Implementamos también la técnica de adsorción de anticuerpos antinucleares mediante la previa obtención de núcleos purificados en solución para evitar su acción como interferentes (pre análisis de ICA's), y a la vez una técnica innocua mediante temperatura para la fijación de cortes histológicos a placas portaobjetos.

Utilizando páncreas de mono como sustrato, se obtuvo mayor cantidad de resultados negativos y menor cantidad de resultados positivos con respecto a los resultados obtenidos utilizando páncreas de rata.

Palabras Clave:

Diabetes Mellitus tipo 1, Anticuerpos Contra Islote de Páncreas (ICA), Inmunofluorescencia Indirecta (IFI), Anticuerpos Antinucleares (ANA).

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ABSTRACT

Presently work was implemented the technique of Immunofluorescence Indirect for the identification of Antibodies Against Island of Pancreas (ICA's) in patients Diabetic type 1 and in their relatives of first grade, for that it was used a conventional sustrate (rats' pancreas) and other commercial (monkeys' pancreas), it was also used specific reagents, including a primary positive control and a conjugated specific adsorbed. The comparison of the results was important to choose the most sustrate convenient and also to evaluate its advantages and disadvantages.

The results were also correlated with the patients' clinical data obtained by means of the concrete clinical Histories identifying factors of risk of Diabetes Mellitus in individuals genetically predisposed.

We also implemented the technique of adsorption of antinuclear antibodies by means of the previous obtained of nuclei purified in solution to avoid their action like interferences ICA's (previous analysis), and at the same time an innocuous technique by means of temperature for the fixation of courts histological to badges. Using monkey's pancreas like substrate, they were obtained bigger quantity of results negative and smaller quantity of positive results with regard to the obtanied results using rats pancreasº.

Key Words

Diabetes Mellitus type 1, Islet Cell Antibody (ICA), Indirect Immunofluorescence (IFI), Antibodies Antinucleus (ANA).

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INTRODUCCIÓN

En el desarrollo de la diabetes, la aparición de anticuerpos contra células de los islotes y el subsecuente deterioro progresivo en la liberación de insulina como respuesta a la glucosa, son considerados parámetros importantes para evidenciar e identificar a parientes de primer grado con riesgo de desarrollar diabetes. La finalidad es intervenir previniendo el desarrollo de esta enfermedad.^(1-4) Según datos oficiales en Bolivia aproximadamente, 10 de cada 100 personas padecen diabetes de las cuales el 15% a 20% corresponden a pacientes que desarrollan Diabetes Mellitus Tipo 1 y entre el 80% a 85% corresponden a pacientes que llegan a desarrollar Diabetes Mellitus Tipo 2.⁽⁵⁾

En el 80 - 85% de los pacientes con Diabetes Mellitus tipo 1 (DM1 autoinmune), se pueden detectar diferentes marcadores serológicos en forma de autoanticuerpos, entre estos tenemos a los Anticuerpos Contra el Islote Pancreático (ICA), contra la Insulina (anticuerpos antiinsulina o IAA), contra la descarboxilasa del ácido glutámico (anticuerpos anti-GAD) y contra la tirosinfosfatasa (anticuerpos anti-IA-2). ⁽⁶⁾

Los Anticuerpos Contra Islote de Páncreas (ICA's) están presentes en el 70% a 80% de los diabéticos diagnosticados recientemente. Varios autores coinciden en que el 65% de las personas con ICA+ tienen el riesgo de desarrollar la DM1 dentro de los 5 años siguientes a su detección.^{( 7, 8, 9 )}

Este trabajo constituye un estudio previo que pretende contribuir y complementar a investigaciones anteriores realizadas en el Instituto SELADIS⁽¹⁰⁾ y principalmente, aportar una alternativa para la prevención de la diabetes en nuestra sociedad, dado que en nuestro medio no existen pruebas de laboratorio para el diagnóstico preventivo de la DM1, y por consiguiente tampoco se toman en cuenta los posibles interferentes para estas pruebas.

Actualmente sobresale la importancia que ha tomado la presencia y detección de los Anticuerpos contra Islote (ICA's) que deben ser investigados especialmente, en familias donde hay antecedentes diabéticos, en los jóvenes que presenten sintomatología diabética y en los que presenten signos contundentes como por ejemplo una glicemia por encima de 110 mg/dL, hecho común en aproximadamente el 10% de mujeres embarazadas.⁽¹¹⁾

RESULTADOS

DISCUSIÓN

Los anticuerpos contra los islotes se detectan antes de desarrollar la enfermedad ya que éstos están en mayor concentración 5 a 10 años antes de manifestarse la sintomatología. Lo cual estaria en relación con los resultados ya que en ninguno de los pacientes con DM1 diagnosticados y con tratamiento, se detectó la presencia de ICA´s mediante el uso de páncreas de mono (Kit Comercial - Binding site). Si consideramos como título ICA+ (positivo) a partir del título 1/2; un 60 % resultó positivo siendo el 85% de estos pacientes niños familiares de pacientes ya diagnosticados con DM1, lo cual es muy significativo por existir una relación con la aparición temprana de un título alto de ICA´s. Es por eso que el desarrollo técnico y teórico del presente trabajo, constituyen un gran avance dentro de los estudios preliminares en cuanto a estudios acerca de Diabetes en lo que a nuestro medio se refiere.

Ambos sustratos sirven para la detección de ICA's, pero la elección del páncreas de mono como sustrato “ideal” se debe a las desventajas que presenta el sustrato convencional; entre las cuales están el tiempo en el desarrollo de la técnica, y ademas a la presencia de hemaglutininas en las células acinares del páncreas de rata, las cuales también producen fluorescencia inespecífica, por este motivo, distintos autores sugieren utilizar cortes histológicos de páncreas humano o de mono, pero de tipo O, lo cual explicaría el mayor número de falsos positivos al utilizar este sustrato.

La estimación de la Sensibilidad y Especificidad, señala una clara diferencia entre ambos sustratos siendo el sustrato más sensible y específico el de páncreas de mono (Binding Site).

La detección de anticuerpos antinucleares es imprescindible debido a que éstos muestran ser interferentes para la técnica de IFI en la detección de ICA's por dos razones:

Por lo tanto se debe hacer una adsorción previa de Anticuerpos Antinucleares en todas las muestras, siendo una muy buena alternativa la técnica estandarizada y desarrollada en el presente trabajo, mediante núcleos purificados en suspensión obtenidos previamente.

La evaluación física realizada mediante los parámetros descritos para la identificación de factores de riesgo incluyendo a las pruebas de rutina indicadoras de diabetes, estuvieron en relación con la presencia de ICA's tanto en pacientes como en sus familiares genéticamente predispuestos.

El presente trabajo es considerado válido ya que el tamaño de la muestra calculado para una Presición del 5%, un Riesgo correspondiente al 5% y una prevalencia de 0,15% de Diabetes Mellitus tipo 1 (DM1) en nuestro medio, es de 18 pacientes. En nuestro caso incluimos 14 familias con un total de 40 personas todas con un antecedente familiar marcado de DM1.

La importancia clínica en detectar uno o más auto anticuerpos característicos de la DM1, permite identificar con mayor probabilidad a personas con riesgo para diabetes tipo 1, dando opción al paciente de adoptar medidas generales de prevención como la adquisición de hábitos dietéticos y de ejercicios físicos, iniciándose así la educación en salud y eventualmente retardar la enfermedad.

º Dra. MARIA TERESA SALINAS (HOSPITAL OBRERO CNS Nº1 - Servicio de Endocrinología).

º Dr. EDUARDO CABRERA RODE Jefe del Departamento de Inmunología de la Diabetes (Instituto Nacional de Endocrinología (INE) de Cuba).

º Dra. MERY ILLANES MANRIQUE y Dra. VIRGINIA RIVAS (Instituto SELADIS Laboratorio de Bioquímica Clínica).

º Dra. GANINA GISELA GARBAY (Matadero Municipal de Achachicala - La Paz Bolivia).

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