Abstract

AMARU CALZADA, ARIEL  and  UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES et al. EXTRACCION DE DNA CON PAPAINA. Ciencia y Medicina [online]. 2004, vol.5, pp. 08-10. ISSN 1816-2908.

En el presente trabajo se realizó la extracción del DNA genómico, por el método clásico de extracción (fenol cloroformo), utilizando la enzima papaina (latex del papaya) en lugar de la proteina-sa K, con el objetivo de economizar los costos y presentar como modelo de practica de extracción de DNA en la práctica de Bioquímica y Biología Molecular. La muestra de leucocitos fue obtenida por la lisis eritrocítica de 5 ml de sangre venosa periférica. El pelet de leucocitos fue disuelto con 2 ml de TNE y 100 ml de SDS al 10% 1. Se agregó 50 ml de papaina (obtenida de la fruta natural papaya). La digestión se mantuvo por 12 horas a 37 grados centígrados, en baño maria. Posteriormente, al tubo se agregó 2 ml de fenol-cloroformo; se mezcló por 5 minutos hasta homogenizar, y se centrifugó a 2000 rpm por 5minutos. Posteriormente el sobrenadante fue transferido a otro tubo de ensayo de 5 ml. A este fue agregado 2 ml de cloroformo-alcohol isomali-co; se mezcló por 5 minutos hasta homogenizar y luego se centrifugó a 2000 rpm por 5minutos. A este ultimo se agregó 3 ml de etanol absoluto frio (mantenido a -20°C), observandose el precipitado de DNA. Se centrifugó a 2000 rpm por 5 minutos. Se eliminó el sobrenadante y se hizo secar en el medio ambiente. El precipitado de DNA fue disuelto en 50 ml de agua destilada. Se realizó con esta muestra la electroforesis en gel de agarosa, junto a otra muestra de DNA extraido con proteinasa k y otro extraido sin proteinasa k ni papaina. Se demostró la presencia de DNA con el método papaina.

Keywords : DNA; Papaina; Leucocitos.